蛋白與核酸互作
? 服務介紹
酵母單雜交技術的基本原理是基于轉錄因子的兩個功能域——DNA結合域（BD）和轉錄激活域（AD）的分離特性。當一個已知的DNA序列作為“誘餌”被插入到酵母表達載體中，并且該序列能夠與某個轉錄因子的BD融合表達時，如果這個轉錄因子同時擁有AD或者能與其他攜帶AD的蛋白相互作用，則可以激活下游報告基因的表達。通過檢測報告基因的活性，如HIS3、LacZ或GFP等，就可以判斷是否發生了特定的DNA-蛋白質間的相互作用
? 實驗步驟
1. 構建酵母單雜交文庫
從目標細胞或組織中提取mRNA并合成cDNA。
將cDNA克隆入含有轉錄激活結構域的酵母表達載體中。
轉化入酵母細胞形成文庫，確保文庫具有廣泛的覆蓋性和高質量。
2. 構建酵母單雜交載體
將目標DNA片段（例如基因啟動子或調控序列）與DNA結合域融合。
插入至酵母表達載體以構建誘餌載體。
3. 共轉化酵母細胞
使用鋰乙酸法或PEG法將構建好的誘餌載體和文庫中的cDNA表達載體共同轉化進特定菌株（如Y1HGold、Y187）。
保證轉化效率，確保文庫的完整性和代表性。
4. 篩選與驗證
在選擇性培養基上篩選轉化后的酵母細胞，這些培養基通常缺乏某些營養成分或是添加了抑制劑，只有那些能夠激活報告基因的細胞才能生長。對篩選出的陽性克隆進行進一步的驗證實驗，包括重復篩選、測序等分子生物學方法來確認相互作用。
