蛋白與核酸互作
? 服務(wù)介紹
CLIP-qPCR（紫外交聯(lián)免疫沉淀結(jié)合qPCR定量技術(shù)）是研究RNA結(jié)合蛋白（RBP）與RNA相互作用的重要方法，其核心原理是通過紫外交聯(lián)與免疫沉淀捕獲RNA-蛋白復(fù)合物，并結(jié)合qPCR進(jìn)行定量分析。該技術(shù)利用365nm紫外光使細(xì)胞內(nèi)RNA與RBP發(fā)生共價(jià)交聯(lián)，增強(qiáng)相互作用穩(wěn)定性，隨后通過特異性抗體沉淀復(fù)合物，經(jīng)酶消化（如蛋白酶K、DNase I）后提取RNA，最終通過qPCR對(duì)目標(biāo)RNA結(jié)合位點(diǎn)的富集效率進(jìn)行檢測(cè)。
? 實(shí)驗(yàn)步驟
1.紫外交聯(lián)：細(xì)胞經(jīng)365nm紫外照射，使RNA與RBP形成共價(jià)交聯(lián)。
2.免疫沉淀：利用特異性抗體捕獲RBP-RNA復(fù)合物。
3.酶消化：通過蛋白酶K、DNase I等去除蛋白和DNA雜質(zhì)，保留目標(biāo)RNA。
4.RNA處理：對(duì)純化后的RNA進(jìn)行3'端加接頭，設(shè)計(jì)位點(diǎn)特異性引物。
5.qPCR定量：通過熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)目標(biāo)RNA的富集效率，精確定位結(jié)合位點(diǎn)
