蛋白與核酸互作
? 服務介紹
EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay），即電泳遷移率變動分析，是一種用于研究蛋白質與DNA或RNA之間相互作用的技術，能夠進行定性和定量分析。其基本原理在于，當蛋白質與DNA或RNA結合形成復合物后，在電場中遷移的速度會比未結合的核酸探針慢。這種遷移速率的變化可以通過PAM凝膠電泳（PAGE）來檢測，從而判斷蛋白質與核酸之間的結合情況
? 實驗步驟
1. 探針的標記
探針的標記是EMSA實驗的關鍵步驟之一，通常使用同位素標記，如[γ-32P]ATP，以確保標記過程準確，避免非特異性標記，以免影響實驗結果。標記反應體系包括待標記探針、T4多聚核苷酸激酶緩沖液、無核酸酶水、同位素和T4多聚核苷酸激酶。標記完成后，可取少量探針用于檢測標記效率。
2. 探針的純化
為了提高EMSA的電泳結果質量，標記后的探針可能需要純化。純化過程通常包括加入醋酸銨和無水乙醇，通過低溫沉淀和離心去除雜質，最后用TE緩沖液溶解沉淀物。
3. EMSA膠的配制
EMSA膠通常使用PAM凝膠，根據實驗需求配制不同濃度的膠。
4. EMSA結合反應
在結合反應中，將標記的探針與蛋白質樣品混合，讓蛋白質與核酸探針結合。此步驟中，蛋白質樣品的純度對實驗結果至關重要，需要避免樣品中存在的雜質干擾實驗結果，同時精確控制樣品濃度以保證實驗的準確性。
5. 電泳分析
結合反應完成后，將樣品加載到預先準備好的EMSA膠上，進行電泳分析。電泳條件如電壓、電流和時間等需要根據實驗的具體要求進行優(yōu)化，以獲得最佳的實驗結果。結合了蛋白質的復合物會比未結合蛋白質的探針電泳速度慢，從而在膠上形成不同的條帶。
