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ChIRP-WB(Chromatin Isolation by RNA Purification-Western Blot)是一種靶向驗證RNA與蛋白互作關系的技術,通過聯合探針Pulldown共沉淀與Western Blot檢測,明確目的RNA與候選蛋白在特定細胞或組織內的相互作用。其核心價值在于驗證ChIRP-Mass等高通量技術篩選出的互作蛋白,或研究不同實驗條件下RNA-蛋白互作的動態變化,是RNA調控機制研究中的關鍵驗證工具。
ChIRP-seq(Chromatin Isolation by RNA Purification followed by sequencing)是一種用于研究RNA與染色質相互作用的高通量測序技術,主要通過特異性探針捕獲目標RNA(如lncRNA、circRNA),并結合測序分析其在全基因組范圍內的結合位點及互作分子。該技術可同時解析RNA、DNA與蛋白質三者的互作關系,是揭示細胞核內非編碼RNA(ncRNA)生物學機制的關鍵手段。
ChIRP-qPCR是ChIRP(Chromatin Isolation by RNA Purification)技術與qPCR(定量聚合酶鏈反應)相結合的實驗方法,主要用于研究RNA與DNA之間的相互作用,可在基因組水平上獲得轉錄調控RNA(如增強子RNA,eRNA)調控的下游靶基因,并結合qPCR研究結合調控強度。該技術利用生物素標記的RNA互補探針特異性結合目標RNA,捕獲與其結合的DNA染色體片段,經純化后通過qPCR對特定DNA序列進行定量分析,從而確定RNA與DNA的結合情況及結合程度。
ChIRP-MS(Chromatin Isolation by RNA Purification-Mass Spectrometry)是一種基于ChIRP技術的蛋白質鑒定方法,主要用于篩選與目標RNA(如lncRNA、circRNA)特異性結合的蛋白質。其核心原理是通過生物素標記的探針靶向捕獲RNA-蛋白質復合物,經純化后利用質譜技術鑒定相互作用蛋白,具有不受RNA長度限制的優勢,可廣泛應用于RNA結合蛋白的系統性發現。