蛋白修飾的檢測(cè)
? 服務(wù)介紹
蛋白泛素化是通過E1（泛素激活酶）、E2（泛素轉(zhuǎn)移酶）和E3（泛素連接酶）的級(jí)聯(lián)催化，將泛素分子連接到靶蛋白的特定氨基酸殘基（如賴氨酸）上的后翻譯修飾過程，其核心功能是調(diào)控蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、定位及功能。檢測(cè)技術(shù)基于對(duì)泛素化修飾狀態(tài)（存在、程度、位點(diǎn)）的直接或間接分析，主要分為免疫檢測(cè)、質(zhì)譜分析、酶活性關(guān)聯(lián)檢測(cè)及活細(xì)胞動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)四大類，各類方法在特異性、靈敏度和適用場(chǎng)景上各具特點(diǎn)。
? 實(shí)驗(yàn)方法
免疫印跡法（Western Blot, WB）
原理：通過SDS-PAGE分離蛋白樣品，轉(zhuǎn)移至膜后用泛素特異性抗體（如抗泛素抗體或靶蛋白-泛素融合抗體）結(jié)合泛素化修飾部分，再經(jīng)二抗標(biāo)記和化學(xué)發(fā)光/熒光檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度，反映泛素化水平。
應(yīng)用場(chǎng)景：快速驗(yàn)證泛素化條帶，適合大量樣品的初步篩選。
免疫組化（IHC）
原理：對(duì)組織切片或細(xì)胞進(jìn)行固定后，用泛素抗體與泛素化蛋白結(jié)合，通過酶促顯色反應(yīng)（如DAB染色）可視化泛素化蛋白在細(xì)胞或組織中的定位及分布。
優(yōu)勢(shì)：可保留樣本的空間結(jié)構(gòu)信息，適用于臨床病理樣本分析。
免疫沉淀（IP）
原理：利用特異性抗體（如靶蛋白抗體）沉淀目標(biāo)蛋白及其泛素化形式，結(jié)合WB或質(zhì)譜分析泛素化狀態(tài)，提高低豐度泛素化蛋白的檢測(cè)靈敏度。
