蛋白修飾的檢測
? 服務介紹
蛋白磷酸化檢測的核心原理是基于特異性識別磷酸化位點的抗體，通過抗體與磷酸化蛋白的靶向結合實現定性或定量分析。磷酸化蛋白由氨基酸（如絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸）與磷酸基團結合形成，其狀態直接關聯細胞信號傳導、基因表達調控等關鍵生物學功能。檢測技術需同時區分磷酸化與非磷酸化狀態，因此抗體的特異性（如單克隆或多克隆抗體）是原理實現的關鍵。
? 實驗步驟
免疫印跡法（WB）：定性與半定量的金標準
原理：通過SDS-PAGE分離蛋白質后轉移至膜（PVDF/NC膜），利用磷酸化特異性抗體結合目標蛋白，經化學發光或熒光信號讀取結果。
靈敏度：依賴抗體特異性，熒光偶聯抗體可實現多蛋白同時檢測；
定量能力：通過條帶密度分析獲得半定量數據，需結合總蛋白與管家基因作為內參；
注意事項：需設置陰/陽性對照（如calyculin A處理組作為陽性對照），避免脫脂牛奶封閉（含磷酸化酪蛋白干擾）。
免疫組化法：組織水平的定位分析
應用場景：在組織切片中可視化磷酸化蛋白的分布與表達量，適用于病理樣本的原位檢測；
技術特點：通過抗體染色與顯微鏡觀察，可直觀呈現磷酸化蛋白在細胞或組織中的空間定位。
