蛋白修飾的檢測(cè)
? 服務(wù)介紹
蛋白乳酸化檢測(cè)主要基于兩種原理：
1.分子量變化檢測(cè)：乳酸化修飾會(huì)在賴氨酸ε氨基上添加一個(gè)乳糖基團(tuán)，使賴氨酸殘基的分子質(zhì)量增加72.021Da。這種分子量的變化可以通過質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)到。
2.分子構(gòu)象變化檢測(cè)：乳酸化修飾會(huì)引起蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的變化，這種變化可以通過特異性抗體識(shí)別
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1. 質(zhì)譜分析
質(zhì)譜分析是一種高靈敏度的乳酸化修飾組蛋白檢測(cè)方法，可以通過質(zhì)譜儀器的高分辨率和高精確性來鑒定和定量乳酸化修飾的組蛋白。LC/MS或LC-MS/MS檢測(cè)賴氨酸肽段是否有乳酸基團(tuán)的特征峰，這是經(jīng)典方法，也是最早用于鑒定Kla修飾的方法。這個(gè)方法的優(yōu)點(diǎn)是精準(zhǔn)全面，不但能鑒定是否有Kla修飾，還能通過讀譜確定修飾的具體位點(diǎn)。
2. 免疫沉淀和ELISA
免疫沉淀和ELISA技術(shù)則是利用具有特異性的抗體，識(shí)別和定量乳酸化蛋白質(zhì)。這些方法具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏的優(yōu)點(diǎn)。乳酸化修飾特異性抗體可以通過免疫印跡、免疫組織化學(xué)等方法檢測(cè)乳酸化修飾的組蛋白。免疫共沉淀是一種將乳酸化修飾的組蛋白與特定抗體結(jié)合，然后通過沉淀的方法將其分離出來的技術(shù)。
3. 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)
在免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，也可以用免疫組化或免疫熒光檢測(cè)樣本中乳酸化修飾。與免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)和WB相比，這個(gè)辦法更直觀，圖片更美觀，還能提供乳酸化修飾在細(xì)胞器中的定位。
4. 乳酸代謝異常指標(biāo)的檢測(cè)
除了直接檢測(cè)乳酸化修飾，還可以通過檢測(cè)乳酸代謝異常指標(biāo)來間接評(píng)估乳酸化修飾的水平。例如，通過檢測(cè)NAD+/NADH比例、細(xì)胞內(nèi)氧水平、線粒體生物合成、線粒體活性等指標(biāo)。市面上有專門的試劑盒用于檢測(cè)這些指標(biāo)，其樣本類型以細(xì)胞系為主。
